服务内容
1、温和条件下进行蛋白抽提,BCA定量,调整蛋白浓度
2、样品预处理:用Protein A/G Sepharose孵育(进行WB验证可以免此步骤)
3、样品与IP抗体进行孵育,之后加入Protein A/G-Agarose进行孵育
4、洗涤Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex,并对免疫复合物进行变性处理
5、沉淀产物SDS—PAGE或者WB鉴定,质谱鉴定由客户自行确定
6、Western blot检测
(1) 电泳:聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分离蛋白样品
(2) 湿法转印(BLOTING:Tank Transfer)
(3) 杂交:用抗体鉴定膜上的特定蛋白(INCUBATION: Antibody)
(4) 化学发光检测(ECL),胶片曝光
7、预实验及正式实验服务
客户提供材料 | 1、新鲜或正确保存的样品 2、目的蛋白一抗,空白或者阴性同种属IgG 3、阳性对照样品(尽量提供) 4、相关文献(可选) |
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提交给客户结果 | 1、预实验曝光结果(胶片及扫描图),预实验采取2个一抗稀释度 2、正式实验曝光结果(胶片及扫描图) 3、完整实验报告 4、IOD值分析报告(可选) |
服务项目说明 | 1、待检测样品可以是待检测蛋白样品,也可以是细胞、组织等其他样品 2、免疫沉淀用抗体 3、检测用抗体 4、特异性二抗 样本要求: 1. 细胞>1×107;组织>100mg;细菌湿重>1mg;植物>100mg;血清>50ul 2. 样品蛋白浓度>1mg/ml,蛋白量>200ug/样品 |